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    饲料中狐狸、水貂、貉子和狗源性的五重实时荧光PCR检测方法
    成奇集团上海申嘉生物科技有限公司 时间:2021-1-14 阅读:904 次 收藏此页

    摘要:针对狐狸、水貂、貉子和狗源性成分进行具体的分析,并针对其特异性引物以及探针进行相应的研究,从而针对其自身的体质来进行相应的产品进行挑选,为了更好的检测狐狸、水貂、貉子和狗针对荧光PCR反应体系以及反应条件来进行相应的筛选,从而更好地突出狐狸、水貂、貉子和狗各自的特异性,选择与自身属性相符的产品来进行相应的实时荧光PCR检测。

    关键词:实时荧光PCR检测;狐狸、水貂、貉子和狗源性成分;特异性;分析探究


    一、应用的材料以及方法

    1.所需材料,文章中接受检查的材料都是来自山东的养殖场的,其中一些动物的生肉以及部分五谷都是源于济南市的农贸市场,而饲料肉骨粉所需要的一些材料大部分都是从一些生产厂家选取的。

    2.所需仪器和试剂,针对动物们提取组织的试剂盒品牌要进行严格的挑选,文章中进行的实验主要使用OMEGA品牌,一些PCR反应试剂主要从大连**生物工程有限公司,引物和探针主要从上海的**生物工程有限公司进行负责,针对动物们的DNA测序主要由山东省农学科学院生物技术研究中心的测序中心进行相关的负责事宜,至于一些荧光定量PCR仪以及高速离心机都由相应的品牌公司产品进行相应的负责。


    3.制定的方案。首先讲解引物与探针的设计,通过对动物们进行的rRNA的基因序列进行相应的调查,从而通过相应软件进行同源性的对比,根据筛选出来的核心片段来进行相应通用引物的设计,从而更好地将引物与探针的特异性展现出来,通过不同的发光基团来进行相应的修饰,来清晰实验效果

    4.其次就是针对阳性扩增内标DNA重组质粒的构建,通过相应的DNA生成工具来进行相应的DNA序列生成,再将其与4种犬科动物源性扩增引物序列进行连接,从而形成新的DNA序列,通过这些扩增的引物序列来进行质粒提取,从而针对重组质粒进行相应的检测验证,从而达到结果与目的的片段得到更好地融合一致;第三就是针对样品的DNA提取,在将样本充分研磨之后针对试剂进行DNA的提取,提取的方法可以借助仪器动物组织提取试剂盒来进行相应的提取工程,也可以通过经典手提法来进行相应的DNA提取,其中参照了分子克隆手册动物组织DNA的提取手法,在利用核酸检测仪进行检测的时候针对DNA的浓度以及OD值都具备一定的要求;第四主要是目的基因的扩增及标准品的构建,针对在狐狸、水貂、貉子和狗身上提取的引物进行相应的PCR扩增,之后再根据条件进行相应的步骤,将其动物源性PCR产物进行切胶回收之后可以将这个转入到感受态细胞当中进行过夜培养,随后挑取单克隆,利用PCR酶来对克隆子进行相应的性质检测和验证,从而针对对克隆子的测序来对狐狸、水貂、貉子和狗源性成分进行相应确认。


    5.多重荧光PCR检测方法的建立,通过针对动物们进行的荧光定量PCR反应体系进行相应的完善,从而更好地建立动物们相对独立的单重荧光定量PCR检测方法,在进行PCR反应检测过程中要严格的根据针对动物们的特异性以及实验过程应该注意的事项进行相应的严格执行。在进行多重实时荧光PCR检测时需要在单一荧光PCR建立最优体系以及试验特异性及稳定性得到相应保障的情况下进行,才能更好的动物们的通用引物、特异探针、内标质粒DNA以及阳性内标探针进行相应的测试。再根据实验参数进行相应的实验优化;第六,多重实时荧光PCR特异性测试,提取从济南农贸市场采购材料的基因组DNA作为模板,根据优化之后的反应体系以及条件来进行相应的荧光定量PCR检测其中的引物以及探针特异性;第七,多重实时荧光PCR灵敏度实验,利用动物组织提取试剂盒来针对动物们的基因组DNA进行相应的提取,再稀释到优化以后的浓度,从而更好地检测动物们的DNA浓度模板以及灵敏度;最后就是针对样品的检测,主要针对饲料肉骨粉所需要的材料进行相应的检测,从而更好地实现重新建立的多重实时荧光PCR检测方法以及样品的价值。


    二、实验得出的结果

    首先针对实验我们可以得知通过引用单一动物PCR扩增结果及单重荧光PCR检测方法的建立;其次就是针对多重荧光PCR检测方法的建立,主要针对动物源性中的引物浓度进行相应的信号提示;第三就是多重荧光PCR特异性实验,更好地针对动物们的引物以及探针进行相应的特异性检测,从而针对动物们体内的指标进行荧光检测;第四就是多重荧光PCR灵敏度的实验,实验主要通过提取动物们DNA来进行相应的检测,从而考察引物以及探针的灵敏度;最后就是针对样品的检测,通过针对样品进行检测从而有效的针对动物们的源性成分更好地进行检测。

    总结

    在近几年来,经常会出现饲料原料以及添加剂受到污染的情况,从而导致动物们自身也受到了一定的影响,威胁到了人们自身的权益,所以人们针对饲料以及肉骨粉来进行了严格的监督,同时也通过研究来针对动物们自身进行相应的检测,从而达到动物们更加健康的生长,间接的减少社会危机问题的浮现。

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